韩国三级高清手机在线版-韩国三级电影久久-韩国三级hd中文字幕一男多女-韩国三级hd中文字幕久久精品-日本精品在线视频-日本精品在线观看视频

您好!歡迎訪問上海牧榮生物科技有限公司網站!
咨詢熱線

17621170138

當前位置:首頁 > 技術文章 > 使用 PROTRAP 進行自上而下的樣品制備

使用 PROTRAP 進行自上而下的樣品制備

更新時間:2023-05-23      點擊次數:811

準備注意事項
ProTrap XG 設備經過優化,可處理 50 μg 蛋白質。
對于可重現和最大的蛋白質沉淀,沉淀過程中樣品中的最大SDS含量應為1%。如果您的提取或裂解緩沖液含有超過 1% SDS,請使用最大離子強度為 300 mM 的緩沖液稀釋。
離心速度基于帶 24 x 1.5/2.0 mL 轉子的標準臺式微量離心機。
提供的時間僅供參考。
如果過濾濾芯中殘留的液體超過幾微升,請將其返回到離心機并重復旋轉,或考慮提高旋轉速度。建議在后續旋轉中使用 3000 ×g (6000 rpm),ProTrap XG 已經過高達 9000 ×g (10,000 rpm) 的測試。

所需材料
所有化學品和試劑應為ACS級/HPLC級或更高。
丙酮
5 M 氯化鈉水溶液
80%甲酸水溶液(冷卻至–20°C)
冷凍水

自上而下的樣品制備方案

對于可重現和最大的蛋白質沉淀,沉淀過程中樣品中的最大SDS含量應為1%。如果您的提取或裂解緩沖液含有超過 1% SDS,請使用最大離子強度為 300 mM 的緩沖液稀釋。 為獲得最佳體驗,樣品應至少含有 50 mM NaCl。 如果需要添加氯化鈉,請使用 5 M 氯化鈉溶液。

  • 不要讓過濾濾芯中的膜在步驟之間變干。

  • 將塞子擰到濾芯的底座上。 

  • 將 100 μL 稀釋的樣品蛋白轉移到堵塞的過濾柱中。

  • 加入 400 μL 室溫丙酮。

  • 蓋上過濾濾芯并輕輕搖晃,傾斜不超過 45°,以混合溶劑。 

  • 將過濾柱插入微量離心管中,等待 30 分鐘,使蛋白質在室溫下聚集。

  • 連接塞子后,以 2500 × g (5000 rpm) 離心×2 分鐘。

  • 從微量離心管中取出過濾盒,倒置并擰下塞子。

  • 將帶蓋的過濾柱放回微量離心管中,并以 500 × (2000 rpm) 離心×3 分鐘。 丟棄通過溶劑的流量。 如果過濾濾芯中殘留任何溶劑,請以 3000 ×g (6000 rpm) 的速度重新旋轉裝置 2-5 分鐘。

  • 用 400 μL 丙酮清洗蛋白質顆粒。立即以 500 × g (2000 rpm) × 2 分鐘離心。丟棄流過洗滌溶劑的流。

  • 更換插頭。在 –20°C 下將過濾筒中的沉淀物冷卻 10 分鐘。

  • 在水中加入 50 µL 冷 (-20°C) 80% 甲酸。蓋上濾芯,放入冰箱 10 分鐘,然后超聲處理 1 分鐘。

  • 加入 450 µL 冷凍水;蓋并渦旋以混合溶劑。

  • 完整的蛋白質可以在干凈的微量離心管中直接回收,以 350 × g (2000 rpm) × 5 分鐘的速度離心。

如果需要進一步的蛋白質凈化,再溶解的蛋白質也可以使用提供的可選 SPE 小柱和 SPE蛋白質/肽凈化方案進行 SPE 。


掃一掃,關注微信
地址:上海市嘉定區安亭鎮新源路155弄16號新源商務樓718室 傳真:Shanghai Mulong Biotechnology
©2025 上海牧榮生物科技有限公司 版權所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備2022017655號-1
主站蜘蛛池模板: 精品久久精品久久久久| 免费Aa久久电影午夜影视 | 中文字幕无码视频在线观看| 91亚欧美日韩一区日日噜| 有码中文亚洲精品就去| 亚洲欧美日韩在线一区二区观看| 性爱在线播放网址| 中文字幕丰满人妻无码区隔壁人爱| 在线观看国产999久1| 亚洲非洲国产欧美日韩在线观看| 汤姆影院最新入口| 欧美在线观看第一区| 久久伊人大狼人综合影院| 加勒比日本东京热| 成人性爱无码视频| 一本伊大人香蕉久久网手机,国产精品久 | 亚洲国产精品国自产拍久久| 设乐夕日在线观看三区| 亚洲AV无码成h人动漫电影蜜臀 | 三叶草欧洲蜜桃色| 免费的欧美三级片在线观看| 九九99香蕉在线视频国产| 国产精品成人无码片子| 很黄很刺激的视频一区二区| 国产精品亚洲精品久久挡不住| 国产亚洲欧美日韩久久一区二区| 成人h动漫精品区二区动漫| 一个人无码专区久久久| 色综合1色综合2色综合3色综合4| 免费 无码 国产在线| 国产亚洲精品久久蜜臀| GOGO大胆全球裸体XXXX| 亚洲182tv国产精品天堂| 欧美色图日本一区二区| 国产又大又粗又硬| 97人人澡人人爽小说| 下载色墦五月丁香| 免费一看一级毛片| 老司机午夜性夜影院| 久久精品一区二区三区樱花岛| 国产99久久久国产精品免费看|