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sydlabs:蛋白酶K溶液

簡要描述:sydlabs:蛋白酶K溶液(肽酶 K、內切蛋白酶 K、內肽酶 K、蛋白酶 K、內肽酶 K、Tritirachium 堿性蛋白酶、Tritirachium 蛋白絲氨酸蛋白酶)

  • 產品型號:MB112
  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2023-12-12
  • 訪  問  量:1123

詳細介紹

品牌其他品牌貨號MB112
規格100毫升供貨周期一個月

sydlabs:蛋白酶K溶液(肽酶 K、內切蛋白酶 K、內肽酶 K、蛋白酶 K、內肽酶 K、Tritirachium 堿性蛋白酶、Tritirachium 蛋白絲氨酸蛋白酶)

蛋白酶 K 溶液通常用于蛋白質消化、DNA 提取、RNA 純化、直接 PCR 和基因分型。由于它能非常有效地滅活 DNase 和 RNase,因此在核酸制備過程中添加重組蛋白酶 K,以分離高度天然、未受損的 DNA 或 RNA;它用于直接 PCR 試劑盒,通過破壞細胞裂解物(組織或細胞培養細胞)中的蛋白質來進行基因分型,并釋放基因組 DNA。

蛋白酶 K 是一種廣譜絲氨酸蛋白酶,最初從真菌 Engyodontium album 中分離出來。該蛋白酶因其消化角蛋白的能力而被命名為“蛋白酶 K"。晶體和分子結構研究表明,該酶屬于枯草桿菌蛋白酶家族,其活性位點具有催化三聯體 (Asp39-His69-Ser224)。蛋白酶 K 酶沒有明顯的切割特異性,優先切割位點是鄰近疏水性氨基酸的肽鍵。

在還原劑(例如 5 mM DTT)存在下,蛋白酶 K 表現出更高的蛋白水解活性。蛋白酶 K 被絲氨酸蛋白酶抑制劑(例如 PMSF、DFP 和 AEBSF)抑制。

蛋白酶 K 在 1% Triton X-100 中具有活性,在 0.5% (w/v) SDS 中全具有活性,可使蛋白質底物變性以提高消化率。該酶在 50-200 ug/mL、pH 7.5-8.0、37 °C 時效果佳,并且通常會因后續苯酚提取而變性。孵育時間從 30 分鐘到 18 小時不等,蛋白酶 K 可以在長時間孵育期間自動消化。

重組蛋白酶 K 是天然蛋白酶的突變體,具有更高的比活性和產量以及更寬的 pH 和溫度范圍。大規模重組酶生產具有批次一致性、純度高和成本效益高等優勢。重組蛋白酶 K 的無 DNA 性質使其非常適合分離 PCR 和 RT-PCR 模板。

MB112:蛋白酶 K 溶液,PCR 級(20 毫克/毫升)

重組蛋白酶K來自酵母細胞,克隆了編碼Engyodontium album(Tritirachium album)內溶蛋白酶的基因。
CAS 號:39450-01-6。
EC:3.4.21.64。
分子量:29.3 kDa。
等電點:8.9。
pH范圍:4.5-12.0;在pH 7.5-11.5范圍內具有高活性。
單位定義: 1 個單位的蛋白酶 K 定義為在 37°C、pH 7.5 下每分鐘從酪蛋白產生 1 umol 酪氨酸的酶活性。
比活性:≥ 780 單位/ml 蛋白質。
溫度曲線:建議溫度范圍 37-70°C; 70°C 時具有最大活性。
消光系數:E 1%= 14.2; 280 nm,10 mM NaCl 和 5 mM CaCl2,pH 8.0。
純度:對每批 PCR 級重組蛋白酶 K 溶液進行測試,確保不含 RNase、DNase 和 DNA。在 40 µg 蛋白酶 K 與 2 ug RNA 在 37°C 下孵育 2 小時的質量控制程序中未檢測到 RNase。在 40 µg 蛋白酶 K 與 1 ug λ DNA 在 37°C 下孵育 6 小時的質量控制程序中未檢測到 DNase。該制劑被認為不含 RNase 和 DNase。
配方:0.2 μM 過濾溶液。
濃度:20毫克/毫升。
溶液配制:PCR 級蛋白酶 K 溶液 (20 mg/ml) 使用 0.22 µm 過濾器進行滅菌,并提供在 50% 滅菌甘油中,以等分試樣在 24°C 至 -80°C 的寬溫度范圍內儲存。推薦的蛋白酶 K 稀釋緩沖液:20 mM Tris-HCl (pH 7.4)、1 mM CaCl2;或 20 mM Tris-HCl (pH 7.4)、1 mM CaCl2 和 2% 甘油。
活化劑:1-5 mM Ca 2+。為了刺激蛋白酶 K 活性,可以添加1-5 mM Ca 2+ 。使用激活劑進行優化可以顯著提高蛋白酶活性。添加EDTA除去鈣后,酶活性會降低25%。如果 EDTA-Ca 2+酶活性會降低 80%通過凝膠過濾從酶溶液中除去復合物,同時可以通過添加過量的Ca 2+來部分恢復復合物。
抑制劑:DIFP 或 PMSF。蛋白酶 K 被 DIFP 或 PMSF 滅活(PMSF 最終濃度為 5 mM)。然而,它不受 EDTA、碘乙酸、胰蛋白酶特異性抑制劑 TLCK、胰凝乳蛋白酶特異性抑制劑 TPCK 和對氯汞苯甲酸鹽的抑制。

運輸:PCR 級重組蛋白酶 K 溶液 (20 mg/ml) 用冰袋運輸。收到后,立即將其存放在下面建議的溫度下。
穩定性和儲存
使用手動除霜冰箱并避免重復凍融循環。
自收到之日起超過 2 年,在 –20°C 下保存。
自收到之日起>1 年,在 2–8°C 下保存。

sydlabs:蛋白酶K溶液

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