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cisbio 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 細(xì)胞試劑盒

簡要描述:磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 檢測能夠檢測組蛋白 H3 尾部的 Ser10 磷酸化,組蛋白 H3 是基因表達(dá)和有絲分裂的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。Ser10 的磷酸化與有絲分裂和減數(shù)分裂期間的染色體濃縮密切相關(guān)。cisbio 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 細(xì)胞試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào):64HH3PEG
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時(shí)間:2023-05-24
  • 訪  問  量:1439

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cisbio 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 細(xì)胞試劑盒

cisbio 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 細(xì)胞試劑盒

概述:磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 檢測能夠檢測組蛋白 H3 尾部的 Ser10 磷酸化,組蛋白 H3 是基因表達(dá)和有絲分裂的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。Ser10 的磷酸化與有絲分裂和減數(shù)分裂期間的染色體濃縮密切相關(guān)。


磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 檢測原理image.png

磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 檢測可測量在 Ser10 位點(diǎn)磷酸化的組蛋白 H3。與 Western Blot 不同,該檢測基于平板,不需要凝膠、電泳或轉(zhuǎn)移。磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 檢測使用 2 種標(biāo)記抗體:一種帶有供體熒光團(tuán),另一種帶有受體。選擇第一種抗體是因?yàn)樗芴禺愋越Y(jié)合蛋白質(zhì)上的磷酸化基序,第二種是因?yàn)樗軌颡?dú)立于蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)識(shí)別蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)磷酸化能夠形成涉及標(biāo)記抗體的免疫復(fù)合物,并使供體熒光團(tuán)靠近受體,從而產(chǎn)生 FRET 信號(hào)。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 2 板檢測方案

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2 板協(xié)議涉及在裂解前在 96 孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,然后將裂解物轉(zhuǎn)移到 384 孔低體積檢測板,然后添加磷酸組蛋白 H3 (Ser10) HTRF 檢測試劑。該協(xié)議使細(xì)胞的生存能力和匯合度得到監(jiān)測。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 1 板測定方案

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使用 HTRF 試劑檢測磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 可以在用于培養(yǎng)、刺激和裂解的單個(gè)板中進(jìn)行。無需洗滌步驟。這種 HTS 設(shè)計(jì)的協(xié)議可實(shí)現(xiàn)小型化,同時(shí)保持穩(wěn)健的 HTRF 質(zhì)量。

HTRF 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 檢測與蛋白質(zhì)印跡法的比較

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將指數(shù)生長的 Hela 細(xì)胞培養(yǎng)至 80% 匯合度,并用諾考達(dá)唑處理 16 小時(shí)。培養(yǎng)基去除和裂解后,通過離心收集可溶性上清液。等量的裂解物用于 WB 和 HTRF 的并排比較。HTRF 檢測的靈敏度是 Western Blot 的 25 倍。使用 HTRF 磷酸組蛋白 H3 (Ser10),僅 256 個(gè)細(xì)胞就足以進(jìn)行最小信號(hào)檢測,而 Western Blot 信號(hào)則需要 6,400 個(gè)細(xì)胞。HTRF 檢測的靈敏度是 Western Blot 的 25 倍。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 作為細(xì)胞增殖的有絲分裂生物標(biāo)志物

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將 Hela 和 A431 細(xì)胞接種在 96 孔板中,并用 Nocodazole 處理 16 小時(shí),Nocodazole 是一種抗有絲分裂劑,可解聚微管并在組蛋白 H3 Ser10 磷酸化達(dá)到最大時(shí)阻斷細(xì)胞有絲分裂。去除細(xì)胞培養(yǎng)基后,加入 50 µl、100 µl 或 200 µl 裂解緩沖液孵育 30 分鐘。將 16 µl 的每種裂解物轉(zhuǎn)移到 384sv 白板上進(jìn)行 HTRF 分析。將裂解體積增加至 200µl 可改善 HTRF 檢測信號(hào)的線性度。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 作為極光激酶 B 抑制的讀數(shù)

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細(xì)胞周期中的磷酸組蛋白 H3-Ser10

總體組蛋白磷酸化在細(xì)胞周期期間波動(dòng)非常顯著,其特征在于有絲分裂中絲氨酸 10 上組蛋白 H3 磷酸化的峰值。極光激酶 B 直接負(fù)責(zé)有絲分裂組蛋白 H3 Ser10 磷酸化。與 BORA 復(fù)合的 Aurora 激酶 A 負(fù)責(zé)在 G2 期初始激活 PLK1,導(dǎo)致在 G2/M 轉(zhuǎn)換檢查點(diǎn)激活細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶 1 有絲分裂進(jìn)入。極光激酶 A 在人類癌癥中經(jīng)常被擴(kuò)增,極光激酶 A 在人類腫瘤中的過度表達(dá)與不良預(yù)后和基因組不穩(wěn)定相關(guān)。此外,極光激酶 B 的高表達(dá)水平與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、卵巢癌和肝細(xì)胞癌的不良預(yù)后相關(guān)。

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