3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）

3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guān)鍵酶，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)，催化1，3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?-磷酸甘油酸，產(chǎn)生1分子ATP，具有影響DNA復(fù)制和修補(bǔ)及刺激病毒RNA合成等生物學(xué)功能，廣泛應(yīng)用于藥物靶標(biāo)設(shè)計(jì)。

測(cè)定原理

3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chǎn)生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

試劑組成和配制

提取液：液體100mL×2瓶，4℃保存。

試劑一：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加1mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑四：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑五：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加4 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

酶液提取

①總PGK酶提取：建議稱(chēng)取約0.1g樣本，加入1mL提取液，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，500g離心5min，取上清測(cè)定。

②胞漿和葉綠體PGK酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g樣本，加入1mL提取液），冰浴勻漿后于4℃，500g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測(cè)定胞漿PGK酶活性，取沉淀加1mL提取液，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，500g離心5min，取上清測(cè)定葉綠體中PGK酶活性。

建議測(cè)定總PGK酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的PGK，則按照步驟②提取粗酶液。

操作

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入100μL試劑一，20μL試劑二，10μL試劑三，10μL試劑四，40μL試劑五，20μL粗酶液，充分混勻，記錄340nm處10s的吸光值A(chǔ)1和310s的吸光值A(chǔ)2，△A=A1-A2

3. 
   

自備用品

天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。

上海牧榮生物科技有限公司

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3-磷酸甘油酸激酶（3-Phosphoglycerate kinase，PGK）

• 中文名稱(chēng)：甲泛葡胺

• 英文名稱(chēng)：Metrizamide

分子式：C18H22I3N3O8

分子量：789.1

• CAS號(hào)：31112-62-6

  級(jí)別：Reagent Grade

• EINECS編號(hào)：250-475-5

• 儲(chǔ)存條件：2～8℃

• 中文別名：甲泛葡胺、阿米派克、甲泛影酰胺、室椎影

• 英文別名：2-((3-(acetylamino)-5-(acetylmethylamino)-2,4,6-triiodobenzoyl)amino)-2-deox、2-(3-ace***ido-2,4,6-triiodo-5-(n-methylace***ido)benzamido)-2-deoxy-d-gluco

• 是否危險(xiǎn)：否

• 
  

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甲泛葡胺/甲泛影酰胺/室椎影/阿米派克/造影胺/Metrizamide