幾丁質(zhì)酶測試盒 

微量法100T/48S

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

幾丁質(zhì)主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官(例如烏賊的軟骨)，以及真菌類的細(xì)胞壁中。而幾丁質(zhì)酶(EC 3.2.1.14)可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。

測定原理：

幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，進(jìn)一步與對二甲氨基苯甲醛產(chǎn)生紅色化合物，在585nm處有特征吸收峰，吸光值增加速率反映了幾丁質(zhì)酶的活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、甲苯（土壤樣品專用）和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體105mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體5mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體5mL×1瓶，4℃保存。（若出現(xiàn)結(jié)晶，可80℃左右加熱溶解后使用）

試劑三：液體5mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心20min，取上清，置冰上待測。

2. 真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測。

3. 培養(yǎng)液：直接測定。

測定操作表：

計算公式：

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.3088-0.003，R2=0.9995

計算公式：

按照樣本重量計算

酶活性定義：37℃條件下，每克組織每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h/g鮮重）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T

=8.096×（ΔA +0.003）÷W

按照蛋白質(zhì)濃度計算

酶活定義：37℃條件下，每毫克蛋白每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T           

= 8.096×（ΔA +0.003）÷Cpr

按細(xì)胞數(shù)量計算

酶活定義：37℃條件下，每104個細(xì)胞每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)

=8.096×（ΔA +0.003）÷細(xì)胞數(shù)量

4、按液體體積計算

酶活定義：37℃條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /mL）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷V樣=8.096×（ΔA +0.003）

V反總：反應(yīng)體系總體積，1mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.4mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

2. 用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.1544x-0.003，R2=0.9995

計算公式：

按照樣本重量計算

酶活性定義：37℃條件下，每克組織每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h/g鮮重）=（ΔA+0.003）÷0.1544×V反總÷(V樣÷V樣總×W) ÷T

=16.192×（ΔA +0.003）÷W

按照蛋白質(zhì)濃度計算

酶活定義：37℃條件下，每毫克蛋白每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h mg prot）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T           

= 16.192×（ΔA +0.003）÷Cpr

按細(xì)胞數(shù)量計算

酶活定義：37℃條件下，每104個細(xì)胞每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /104 cell）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)

=16.192×（ΔA +0.003）÷細(xì)胞數(shù)量

4、按液體體積計算

酶活定義：37℃條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活單位。

幾丁質(zhì)酶活性（mg/h /mL）=（ΔA+0.003）÷0.3088×V反總÷V樣=16.192×（ΔA +0.003）

V反總：反應(yīng)體系總體積，1mL；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.4mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL

注意事項(xiàng)：

1. 反應(yīng)結(jié)束后立即進(jìn)行比色。

2. 試劑四有一定的毒性，請操作時做好防護(hù)措施。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價格。

幾丁質(zhì)酶測試盒